Principio:
El fósforo inorgánico reacciona con el
molibdato de amonio en presencia de acido sulfúrico para producir un complejo
de fosfomolibdato no reducido. El incremento de la absorbancia a 340nm es
directamente proporcional a la concentración de fósforo inorgánico en la
muestra.
Recolección
y preparación de la muestra:
La muestra de elección deberá ser un suero
fresco, claro y no hemolizado. Las muestras podrán guardarse hasta 7 días a una
temperatura de 2-8ºC y hasta por 6 meses a una temperatura de -20 a 0ºC.
Preparación
del reactivo:
El reactivo de trabajo se prepara combinando
los volúmenes iguales del reactivo de molibdato de fosforo y del reactivo
catalizador del fosforo. Bien mezclado antes de usarlos.
Materiales:
·
Reactivo de trabajo.
·
Un anazador que sea capaz de
leer la absorbancia con exactitud.
·
Cubetas de 1 cm o una celda
de flujo que transmita luz a 340nm.
·
Tubos de ensayo del tamaño
adecuado.
·
Pipetas del tamaño adecuado.
·
Agua des ionizada.
·
Un cronometro apropiado.
Procedimiento:
·
Prepare el volumen requerido
de reactivo de trabajo de fósforo.
·
En tubos de ensayo por
separado, pipetee 10 µL de agua des ionizada, estándar de fosforo o del suero a
ser analizado.
·
Agregue 1.0 mL del reactivo de
trabajo del fosforo y mezcle.
·
Incube la mezcla por 2
minutos a una temperatura de 18-26ºC, por un minuto a 37ºC. Determine la absorbancia del estándar (As) y
de cada suero (A) a 340nm utilizando la muestra de agua des ionizada como
blanco de reactivo.
Cálculos
& Resultados:
A= absorbancia de la muestra desconocida.
AS= absorbancia del estándar.
La concentración del fosforo inorgánico se
expresa en mmol/L (mg/dL).
Valores
esperados:
0.97- 1.45 mmol/L
(3.0-4.5mg/dL). Se sugieren estos
valores como referencia. Se recomiendan que cada laboratorio establezca el
rango normal para el área en que esta localizado.
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